配制臺式高速離心機(jī)密度梯度溶液的方法

  前兩天小編給大家講解了臺式高速離心機(jī)密度梯度離心法和梯度介質(zhì)的回收，為了讓大家對此問題認(rèn)識更全面，今天給大家科普下密度梯度溶液的配制方法。配置密度梯度溶液，一般情況下是先配制高濃度儲備液，再用緩沖液稀釋到需要的濃度，階梯梯度配制若干個(gè)不同密度的溶液，連續(xù)梯度一般配制兩種密度的溶液，其中一種是梯度的大密度，另一種是梯度的小密度。

  用各種離心機(jī)轉(zhuǎn)子在梯度介質(zhì)中分離顆粒時(shí)，使用兩種形式的梯度，即自形成梯度和預(yù)形成梯度。自形成梯度是梯度介質(zhì)在離心場作用下顆粒重新分布，形成從頂部到底部逐漸增加密度的液柱。預(yù)形成梯度是指在離心之前，用梯度形成儀或人工的方法預(yù)先制備密度梯度柱。按照梯度結(jié)構(gòu)可分為不連續(xù)梯度（即階梯度）和連續(xù)梯度兩種類型。連續(xù)梯度又有線性梯度、指數(shù)梯度、對數(shù)梯度和復(fù)合梯度。有時(shí)為了速率區(qū)帶離心分離的方便，又設(shè)計(jì)了等動(dòng)力梯度，為了防止在區(qū)帶轉(zhuǎn)子中的徑向稀釋，設(shè)計(jì)了等體積梯度。配置密度梯度溶液需要注意很多事項(xiàng)。

  堿金屬鹽溶液在4℃下可以長期保存，但含碘的物質(zhì)應(yīng)避光保存，多元醇易受微生物污染，保存在-20℃使用時(shí)不方便。好臨時(shí)配置。有些使用冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心需要在無菌條件下進(jìn)行，但高壓消毒對有些梯度介質(zhì)會帶來一些不利影響，如引起Percoll顆粒不穩(wěn)定，配制時(shí)可只對稀釋劑進(jìn)行消毒，碘化梯度介質(zhì)中只有Metrizamide可以進(jìn)行高壓消毒。溶解多糖是先給粉劑里加入少許水?dāng)嚢?，使之成為半透明的糊狀，再稀釋到所需體積。如果直接把大量水或緩沖液加到多糖粉劑里，會形成大量凝塊。可用比重瓶或折射儀測定梯度溶液的密度和所有介質(zhì)的密度分布，用下述方程能快速地根據(jù)折射率計(jì)算溶液的密度：

ρ=An-B 
式中，A和B的值隨著梯度介質(zhì)和溫度的變化而不同，如用0.8% NaCl、120mmol/L Tricine-NaOH配制的等滲Iodixanol梯度中，A=3.2984，B=3.3967。

儲存液與稀釋劑間通過混合得到的溶液密度可用下式計(jì)算：

式中，D為所需密度；V為儲存液的體積；d為儲存液的密度；V1為稀釋液的體積；d1為稀釋液的密度。
  經(jīng)過小編的講解，大家是否清楚了蜀科臺式高速離心機(jī)密度梯度溶液的配制方法，后續(xù)更多離心機(jī)知識請關(guān)注蜀科公眾號：shukeyiqi，或者登陸我們的查看。